走進科研

文章名稱：PKMYT1 kinase ameliorates cisplatin sensitivity in osteosarcoma

中文名稱：PKMYT1激酶改善骨肉瘤對順鉑的敏感性

雜志名：Signal Transduction and Targeted Thera

期刊影響因子：40.6

第一作者：Binfeng Liu

通訊作者：Zhihong Li

發表日期：2025.5.21

DOI：10.1038/s41392-025-02250-7

概述

本研究通過 CRISPR 篩選發現 PKMYT1 是順鉑抗性的重要調節因子。它通過抑制DNA損傷修復路徑（影響NPM1 和下游 BRCA1 等因子的功能）來幫助OS細胞逃避化療。沉默 PKMYT1 或使用其抑制劑 RP6306 可以增強順鉑的殺傷效果，為克服骨肉瘤化療耐藥性問題提供了新方向和聯合治療思路。

研究背景

順鉑（Cisplatin, DDP）是治療骨肉瘤（OS）的主要化療藥物，但普遍存在耐藥性這個問題導致其臨床療效受限。因此，更為重要的是開發增強OS細胞對DDP敏感性的方案。本研究旨在識別調控DDP敏感性的關鍵因子，并探討其作為潛在治療靶點的可能性。

實驗方法

研究團隊采用了基因組范圍的 CRISPR 篩選方法，結合轉錄組測序，識別出調控 DDP 敏感性的關鍵因子。隨后，通過分析患者來源的臨床樣本，并進行體外功能實驗，驗證這些因子的作用。此外，研究還使用了選擇性PKMYT1 抑制劑 RP6306，評估其與 DDP 聯用的協同效應。

CRISPR 激酶庫篩選方案的示意圖

靶向 PKMYT1 通過調節 NPM1 的磷酸化來改善順鉑對OS的敏感性的模型示意圖

研究結果

篩選結果揭示，PKMYT1 是調控OS細胞對DDP敏感性的關鍵因子。
DDP 處理可誘導OS細胞中 PKMYT1 的激活。
PKMYT1 的沉默顯著增強了細胞對 DDP 的敏感性，提示其在促進化療耐藥性中的作用。
在機制上，PKMYT1通過磷酸化核磷蛋白1（NPM1）S260 位點，競爭性地抑制 NPM1 的 SUMO 化。這種修飾干擾了DNA損傷反應因子（如BRCA1、RAP80和RAD51）的募集，最終影響雙鏈斷裂（DSB）的修復。
選擇性 PKMYT1 抑制劑 RP6306 與 DDP 聯用，可增強其在OS細胞中的細胞毒性作用。

實驗中用到的NEST產品：胎牛血清，涉及的細胞：143B、U2OS、HOS、U2OS/DDP、293T
本研究中共使用了多種人骨肉瘤（OS）細胞系及對照細胞系，包括：
正常成骨細胞：hFOB1.19
OS細胞系：Saos-2、MG63、U2OS、HOS、143B
順鉑耐藥細胞株：U2OS/DDP
其他細胞系：HEK293T、ZOS/M
細胞培養條件如下：不同細胞系根據推薦標準，使用不同的培養基（DMEM、MEM、McCoy's 5A等）。培養基統一添加 10% NEST胎牛血清（FBS），另外還補充了1%青鏈霉素雙抗，維持無菌狀態。
本研究使用的 10% NEST胎牛血清（FBS）是細胞培養系統中的核心成分之一，為細胞提供穩定的生長因子、激素及粘附蛋白。